Инокуляцию стерилизованного субстрата проводят в стерильных условиях в боксе или ламинарном шкафу. Субстрат перед инокуляцией охлаждают либо в автоклавах (тогда на входе воздуха в шкаф ставят ватный фильтр), или в боксе, куда подают очищенный через фильтр воздух. Фильтр должен задерживать частицы размером более 0,3 мкм. Такого типа фильтры устанавливают в ламинарных шкафах (НЕРА-фильтр). Во время инокуляции пакет открывают, вносят посевной мицелий и быстро закрывают. Перед инокуляцией посевной мицелий измельчают до отдельных зерен. Поверхность бутылей и пакетов протирают 70% спиртом или 10% гипохлоратом натрия. Так же дезинфицируют и поверхность рабочего стола или ламинарного шкафа. Персонал надевает стерильные халаты, шапочки, бахилы, моет и дезинфицирует руки 70% спиртом. Мицелий пересыпают из емкости в пакеты в зоне ламинарного шкафа. Норма внесения мицелия 2-5% от массы субстрата. Для ускорения процесса колонизации субстрата мицелий необходимо распределить как можно равномерней. При внесении мицелия в центральный канал скорость колонизации субстрата увеличивается по сравнению с поверхностной инокуляцией. Для инокуляции не обязательно используется зерновой мицелий, состоящий из отдельных обросших грибницей зерновок ржи, пшеницы или проса. При культивировании Спитаке используют также опилочный и жидкий мицелий. Опилочный мицелий выращивают на смеси из опилок и отрубей зерновых культур. Этот мицелий уже адаптирован к опилочному субстрату, поэтому он быстро начинают разрастаться при посеве на сходную среду. Перед посевом мицелий измельчают для равномерного распределения по субстрату. Норма внесения опилочного мицелия составляет 7% от массы субстрата. Жидкий мицелий выращивают на жидкой питательной среде (пивное сусло 1-2% или суспензия муки пшеницы 1,5-2%). В среду добавляют немного опилок или древесного отвара для лучшей адаптации на опилочном субстрате. Применение жидкого мицелия возможно только при наличии хорошо стерилизованного субстрата и стерильных условий инокуляции. Для инокуляции жидким мицелием применяют специальные дозаторы, которые позволяют значительно сократить время инокуляции. В пакет субстрата массой 2-4 кг вносится 20-50 мл жидкого мицелия.
